摘要: 研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境水體中抗生素污染相當廣泛，包括磺胺類抗生素。本應用簡報介紹了一種將固相萃取 (SPE) 與液相色譜-串聯(lián)四極桿質譜 (LC/MS/MS) 聯(lián)用來測定水中磺胺類抗生素的可靠方法。所述的 LC/MS/MS 方法在純水中線性關系良好，在測試的 0.5–100 µg/L 濃度范圍內，19 種磺胺類化合物的線性回歸系數(shù)均高于 0.996。這些化合物的方法定量限 (LOQ) 值 (S/N = 10) 均處于 2 ng/L 或以下的水平。純水中濃度為 20、200 和 400 ng/L 的加標回收率測試表明，大多數(shù)化合物的回收率值在 70.5%–96.4% 的范圍內，RSD (n = 6) 低于 15%。以地表水為基質，在 20 ng/L 的濃度水平進行加標回收測試，所有分析物的加標回收率均在 80.2%–89.5% 的范圍內， RSD 低于 20%。這些結果表明，所開發(fā)的方法靈敏、準確、可靠，可以用于實際環(huán)境地表水的分析。

據(jù)估計，每年人類和牲畜使用的抗生素超過 100000 噸，且由于大多數(shù)抗生素未經有效處理就排入環(huán)境，這些物質在環(huán)境中的歸趨受到日益密切的關注[1]。研究發(fā)現(xiàn)，在一些亞洲國家的水體中，某些特定抗生素的含量甚至高達 450 µg/L[1]。此類污染可能引起抗生素耐藥性，破壞微環(huán)境的平衡，并進一步影響生態(tài)系統(tǒng)。許多調查表明，磺胺類藥物是中國水體中存在的主要抗生素類別之一[2,3]。但是目前還沒有一種穩(wěn)定可靠的方法用于水體中這組抗生素的常規(guī)監(jiān)測。美國 EPA 1694 方法中針對第 1 組分析物描述了一種包括 10 種磺胺類藥物及其共生物在內的分析方法[4]。在中國，磺胺類藥物的用量大，涉及的種類多，在環(huán)境水基質中的存在經常見諸報道[2,3]，常規(guī)監(jiān)測方法仍然傾向于針對單一類別物質。本研究展示了一種使用 SPE 小柱凈化富集和 LC/MS/MS 結合的方法同時測定水中 18 種常見的磺胺類藥物和 1 種共生物的可靠方法。

實驗部分:化學品與試劑方法中共選擇 19 種化合物進行監(jiān)測，其中包括 18 種磺胺類藥物和 1 種磺胺類共生物（甲氧芐啶）。此外，還包括四種同位素標記的內標 (IS1-IS4)，其中三種內標 (IS1-IS3) 作為回收內標，在樣品前處理前添加以用于內標法定量；剩余一種內標 (IS4) 作為進樣內標，在樣品前處理的后一步加入，用于評估回收率。詳細的化合物信息如表 1 所示。采用 LC/MS 級甲醇 (Merck) 和 Milli-Q 水制備流動相。其它試劑（如甲酸、氨水和乙酸銨）均為 HPLC 級，購自 SigmaAldrich。

結果與討論: LC/MS/MS 條件的優(yōu)化磺胺類藥物都含有一個共同結構（如圖 1A 所示），在酸性條件下容易發(fā)生質子化。因此，使用 Agilent 6470 LC/MS/MS 選擇正離子模式和酸性流動相來優(yōu)化 MS/MS 采集參數(shù)，所得參數(shù)列于表 1 中。甲醇/ 酸化水能夠使兩組異構體獲得基線分離，但乙腈/酸化水對異構體磺胺甲氧噠嗪和磺胺對甲氧嘧啶的分離度較差。因此，選擇甲醇/酸化水作為二元流動相。AgilentEclipse Plus 和 Poroshell C18 色譜柱在甲醇/酸化水條件下均能使異構體獲得基線分離。本研究選用 Poroshell 色譜柱，主要是由于其內填鍵合的薄殼層填料，反壓相對較低。進一步調整梯度洗脫，以確保分析物在短時間內從色譜柱上洗脫下來并得到良好分離

另外，在高有機相組成下沖洗至少四分鐘，以除去殘留在色譜柱上的強保留基質組分。在 6470 LC/MS/MS 下優(yōu)化得到的 MRM 離子對及其它參數(shù)也適用于 Agilent Ultivo LC/MS/MS 系統(tǒng)。